实验方法原理

SPA 纯品系由含 A 蛋白的 Cowan I 株金黄色葡萄球菌中纯化获得。其制备过程除细菌培养外，主要有提取和纯化这两个工艺组成。提取方法多种，其中溶葡萄球菌素与亲和色谱组合方法最有效。现介绍如下。

实验材料 菌苔

试剂、试剂盒 Tris · HCl碳酸氢铵溶葡萄球菌素饱和硫酸铵

仪器、耗材 DEAE-Sephadex A50 IgG-Sepharose 4B 亲和层析柱

实验步骤

1. 用 0.05 mol/L（pH 7.5）的 Tris · HCl 洗下菌苔，每 100 g 湿菌加溶葡萄球菌素 5 mg，调节 pH 值到 3.5，离心后取上清，并将 pH 值调到 7.0。

2. 用饱和硫酸铵沉淀，溶解透析，透析物用 DEAE-Sephadex A50 纯化，以 0.1 mol/L 碳酸氢铵（NH4HCO3）平衡后上样，再平衡过夜。

3. 用 0.4 mol/L NH4HCO3 洗脱（流速 1.5 ml/min），样品测定 A275 nm 和活性，将含活件者合并、浓缩、冻干保存于 -40℃ 中。

4. 上述纯化获得的 SPA 可进一步用 IgG-Sepharose 4B 亲和层析柱过滤，进一步纯化 SPA。

5. 纯度鉴定用 7.5％ 聚丙烯酰胺凝胶为分离系统进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，样品浓度为 1 mg/ml，加样量为 40 μl。电泳结果应显示一条明显条带。